BASE DE AGAR GC

Descripción

BASE DE AGAR GC

La mayoría de las infecciones gonocócicas son infecciones del tracto genital inferior sin complicaciones causadas por una infección directa del epitelio cilíndrico de las membranas mucosas. Neisseria gonorrhoeae es el agente causal de las infecciones gonocócicas. La mayoría de las cepas de Neisseria tienen requisitos de crecimiento complejos; algunas cepas pueden ser extremadamente sensibles a los ácidos grasos, lo que requiere la incorporación de almidón soluble en los medios de crecimiento. Johnston desarrolló un medio que podía obtener el crecimiento de Neisseria en 24 horas en lugar de las 48 horas habituales. Este medio fue posteriormente modificado por Carpenter y Morton, mediante la adición de hemoglobina. Thayer y Martin mejoraron la selectividad de GC Medium mediante la incorporación de los antibióticos colistina, vancomicina y nistatina. Un lactato de trimetoprim antibiótico adicional se combinó más tarde con VCN para aumentar aún más la selectividad del medio. Para el cultivo de organismos exigentes, el medio debe complementarse con factores de crecimiento esenciales proporcionados predominantemente por extracto de levadura. Esto se puede reemplazar con un suplemento químicamente definido que contenga factores de crecimiento esenciales disponibles del extracto de levadura en el Suplemento de crecimiento vitamínico (paquete doble). El factor X necesario para el crecimiento de especies exigentes de Haemophilus lo proporciona la hemoglobina.

La base del medio GC se puede utilizar como base para la preparación del medio Thayer Martin mediante la adición del suplemento de autolisado de levadura, que contiene autolisado de levadura como fuente de factores de crecimiento esenciales y antibióticos VCNT como agentes selectivos. La vancomicina (3 mg/L) en el Suplemento VCNT se reemplazó con lincomicina, ya que se descubrió que esta última inhibía menos los gonococos. También se reemplazó la nistatina por anfotericina B para mejorar la selectividad del medio a los contaminantes de levadura, que se encuentran regularmente en las muestras vaginales. Este suplemento modificado es el suplemento Linco T. Ciertas cepas de gonococos resultaron ser sensibles a 3 mg/lt de vancomicina utilizada regularmente. Por lo tanto, la concentración de vancomicina se redujo a 2 mg/l para obtener el crecimiento de estas cepas sensibles. Este suplemento modificado con concentraciones reducidas de vancomicina y anfotericina B es el Suplemento Vanclo T.

COMPOSICIÓN

PRINCIPIO

GC Agar contiene peptona especial, que aporta nutrientes esenciales a los organismos. La presencia de almidón asegura que los metabolitos tóxicos producidos por Neisseria se neutralicen. Los fosfatos previenen cambios en el pH debido a la producción de aminas que pueden afectar la supervivencia de los organismos. El factor X (hemina) necesario para las especies de Haemophilus lo proporciona la hemoglobina.

Los otros suplementos añadidos proporcionan factor V, es decir, NAD (dinucleótido de nicotinamida y adenina) para especies de Haemophilus y aminoácidos, coenzimas, iones férricos, etc., que mejoran el crecimiento de Neisseria patógena. Evite el algodón en rama para la recolección de muestras. Inocular inmediatamente después de la recolección de muestras. Los especímenes se deben sembrar en la superficie de las placas para obtener algunas áreas con mucha semilla y otras con poca semilla. La incubación se realiza a 37°C en una atmósfera con 70% de humedad y 5-10% de dióxido de carbono. Toda Neisseria presunta debe confirmarse mediante pruebas de fermentación de carbohidratos y otras pruebas serológicas.

INSTRUCCIONES DE USO

• Disolver los 36,0 gramos en 500 ml de agua purificada/destilada, para hacer una base de doble concentración.
• Calentar a ebullición para disolver el medio por completo.
• Suspender por separado 10 gramos de Hemoglobina en polvo en 500 ml de agua purificada/destilada (solución al 2%) para hacer una solución uniforme. Esterilice por separado ambas soluciones en autoclave a una presión de 15 psi (121 °C) durante 15 minutos.
• Enfriar a 45-50°C.
• Mezcle ambas soluciones de manera uniforme y agregue asépticamente el contenido rehidratado de dos viales de Suplemento GC con antibióticos.
• Mezclar bien y verter en placas Petri estériles.
• Para aumentar la selectividad de los suplementos de antibióticos medianos como el Suplemento VCN o el Suplemento VCNT o Se puede añadir el Suplemento Linco T o el Suplemento Vanclo T (dos viales por litro).
• Para mejorar las propiedades nutricionales del medio, el suplemento de crecimiento de vitaminas amino o el autolisado de levadura. Se puede agregar un suplemento.
• Para el agar sangre chocolate, prepare un medio de concentración simple utilizando 3,6 gramos en 100 ml de agua destilada. esterilizar por esterilizar en autoclave a una presión de 15 psi (121 °C) durante 15 minutos y añadir sangre desfibrinada al 5 % v/v.
• Mezclar bien y calentar a 80°C durante 10 minutos.

ESPECIFICACIONES DE CONTROL DE CALIDAD

Aspecto del polvo: polvo fluido homogéneo de color crema a amarillo Aspecto del medio preparado: medio basal: gel transparente a ligeramente opalescente de color amarillo claro. Después de la adición de hemoglobina al 2%: se forma un gel opaco de color marrón chocolate en las placas de Petri. : 7,6 ± 0,2 pH (a 25°C)

INTERPRETACIÓN
Características de cultivo observadas en presencia de 5-10% de dióxido de carbono (CO2) y 70% de humedad con hemoglobina al 2% estéril añadida y suplemento de GC con antibióticos, después de una incubación.

EMBALAJE

En envases de 100 g y frascos de 500 g.

ALMACENAMIENTO

Polvo deshidratado, de naturaleza higroscópica, almacenar en un lugar seco, en recipientes herméticamente cerrados por debajo de 25°C y proteger de la luz solar directa. En condiciones óptimas, el medio tiene una vida útil de 4 años. Cuando se abre el envase por primera vez, anote la hora y la fecha en el espacio de la etiqueta provisto en el envase. Una vez que se haya extraído la cantidad deseada de medio, vuelva a colocar la tapa herméticamente para protegerla de la hidratación.

Deterioro del producto: no lo use si muestra evidencia de contaminación microbiana, decoloración, secado o cualquier otro signo de deterioro.

ELIMINACIÓN

Después de su uso, las placas preparadas, los recipientes de muestra/espécimen y otros materiales contaminados deben esterilizarse antes de desecharse.

REFERENCIAS

1. Carpenter CM y Morton HE, 1947, Proc. Asociación del Estado de Nueva York Salud
pública. Lab., 27:58 2. Faur YC, Wilsburd MH, Wilson ME y May PS, 1973, Health Lab Sci.,
10. 44-54 3. Johnston J., 1945, J. Vener. Dis. Informe, 26:239.
4. Martin JE y Lester A., 1971, HSMHA Health Rep., 86:30 5.
Seth A., 1970, Brit. J. Vener. Dis., 46, 201-202 6.
Reyn A. y Bentzon MW, 1972, Brit. J. Vener. Dis., 48, 363-368 7.
Mirrett S., Reller LB y Knapp JS, 1981, J. Clin. Microbiol., 14. 94-99 8.
Thayer JD y Martin JE, 1964, Public Health Rep., 79:49 9.
Thayer JD y Martin JE, 1966, Public Health Rep., 81:559 10.
Murray PR, Baron EJ, Pfaller MA, Jorgensen JH y Yolken RH, (Eds.), 2003, Manual of Clinical Microbiology, 8th Ed., American Society for Microbiología, Washington, DC