BASE DE AGAR BAIRD PARKER

Descripción

BASE DE AGAR BAIRD PARKER

El agar Baird Parker fue desarrollado por Baird Parker a partir de la formulación telurito-glicina de Zebovitz et al para el aislamiento y recuento de estafilococos en alimentos y otros materiales, ya que permite una buena diferenciación de las cepas coagulasa positivas. Se ha encontrado una alta correlación entre la prueba de la coagulasa y la presencia de una zona clara de lipólisis en este medio, que se debe a la lecitinasa de los estafilococos que descomponen la yema de huevo. Por otra parte, los estudios demuestran que casi el 100% de los estafilococos coagulasa positivos son capaces de reducir el telurito, que produce colonias negras, mientras que otros estafilococos no siempre pueden hacerlo. El medio resultó ser menos inhibidor de Staphylococcus aureus que otros medios y, al mismo tiempo, más selectivo. Posteriormente, el uso del agar Baird-Parker fue adoptado oficialmente por la AOAC International y se recomienda en la USP para la realización de pruebas de límite microbiano. Recientemente, el comité ISO también ha recomendado este medio para el aislamiento y recuento de estafilococos.

La identidad del Staphylococcus aureus aislado en Agar Baird-Parker debe confirmarse con una reacción de coagulasa. El Agar Baird Parker también puede utilizarse para detectar la actividad de la coagulasa añadiendo plasma fibrinógeno. Suplemento inhibidor de tripsina de plasma de fibrinógeno disuelto en 10 ml de agua destilada estéril añadido a 90 ml de medio fundido estéril mantenido a 45-50°C. En este medio, las colonias positivas a la coagulasa aparecen de color blanco a gris-negro rodeadas de una zona opaca debida a la actividad de la coagulasa en las 24-48 horas siguientes a la incubación a 35°C. La reducción del telurito es necesaria debido a la ausencia de emulsión de yema de huevo. El resultado es un agar translúcido y colonias de estafilococos de color blanco a gris. Para obtener resultados cuantitativos, seleccionar 20-200 colonias. Contar las colonias similares a Staphylococcus aureus y comprobar si reaccionan a la coagulasa. Indique el número de Staphylococcus aureus por gramo de alimento. Smith y Baird-Parker descubrieron que la adición de 50 mg/l de sulfametazina en el medio suprime el crecimiento y la proliferación de las especies de Proteus.

La glicina y el piruvato favorecen el crecimiento de Staphylococcus. Con la adición de yema de huevo, el medio se vuelve amarillo, opaco. El aditivo de yema de huevo, además de proporcionar enriquecimiento, ayuda en el proceso de identificación al demostrar la actividad de la lecitinasa (reacción de la yema de huevo). Una zona clara y colonias gris-negras en este medio son diagnósticas de estafilococos coagulasa positivos. Tras una incubación posterior, se desarrolla una zona opaca alrededor de las colonias, que puede deberse a la actividad lipolítica. Para probar el medio, inocular el material a examinar (0,1 ml por placa de 90-100 mm de diámetro), incubar a 37°C y realizar la primera lectura al cabo de 24-26 horas. Las colonias de Staphylococcus aureus son negras y brillantes, con un fino borde blanco, rodeadas de una zona clara. Incubar a 37°C durante otras 24 horas y realizar la prueba de la coagulasa en las colonias con las características anteriores, que se hayan desarrollado durante el período de incubación posterior. Las placas deben utilizarse el mismo día de su preparación o en un plazo de 48 horas, para evitar la pérdida de definición en las zonas precipitadas. El medio basal, sin la yema de huevo ni el telurito, es perfectamente estable. Las colonias de algunos organismos contaminantes pueden digerir la reacción del halo de coagulasa. Otras bacterias pueden crecer en este medio, pero la prueba bioquímica diferenciará los estafilococos coagulasa positivos de los demás organismos.

COMPOSICIÓN

PRINCIPIO

La triptona, el extracto de carne de vacuno y el extracto de levadura son fuentes de nitrógeno, carbono, azufre y vitaminas. El piruvato sódico no sólo protege las células lesionadas y ayuda a la recuperación, sino que también estimula el crecimiento de Staphylococcus aureus sin destruir la selectividad. El cloruro de litio y el telurito de potasio inhiben la mayor parte de la microflora contaminante, excepto el Staphylococcus aureus. El aditivo telurito es tóxico para las cepas que limpian la yema de huevo distintas de S.aureus y confiere un color negro a las colonias.

INSTRUCCIONES DE USO

•  Disolver 63,0 gramos en 950 ml de agua purificada/destilada.
• Calentar hasta ebullición para disolver completamente el medio.
• Esterilizar en autoclave a 15 psi de presión (121°C) durante 15 minutos.
• Enfriar a 50°C y añadir asépticamente 50 ml de emulsión concentrada de yema de huevo y 3 ml de solución estéril de telurito potásico al 3,5% o 50 ml de emulsión de telurito de yema de huevo.
• Para una selectividad adicional, si se desea añadir el contenido rehidratado de 1 vial de BP Sulpha Supplement.
• Alternativamente, puede utilizarse 1 vial de Fibrinogen Plasma Trypsin Inhibitor Supplement por 90 ml de medio en lugar de Egg yolk Tellurite Emulsion para la identificación de Stapylococci coagulasa positivos.
• Mezclar bien y verter en placas Petri estériles.

INTERPRETACIÓN

Características culturales observadas tras la incubación. La tasa de recuperación se considera del 100% para el crecimiento bacteriano en Agar Casein Digest de Soya.

EMBALAJE

En envases de 100 y 500 gramos.

ALMACENAMIENTO

Polvo deshidratado, de naturaleza higroscópica, almacenar en un lugar seco, en recipientes herméticamente cerrados entre 25-30°C y proteger de la luz solar directa. En condiciones óptimas, el medio tiene una vida útil de 4 años. Cuando se abra el envase por primera vez, anote la hora y la fecha en el espacio previsto para ello en la etiqueta del envase. Una vez extraída la cantidad deseada de medio, vuelva a colocar el tapón herméticamente para protegerlo de la hidratación.
Deterioro del producto: No utilizar si presentan indicios de contaminación microbiana, decoloración, desecación o cualquier otro signo de deterioro.

DISPOSICIÓN

Después de su uso, las placas preparadas, los recipientes para muestras y otros materiales contaminados deben esterilizarse antes de desecharlos.

REFERENCIAS

1. Assoc. off. Anal. Chem., 1971, 54:401.

2. Baer, 1971, J. Assoc. Off. Anal. Chem., 54:732.

3. Baird-Parker A. C., 1962, J. Appl. Bacteriol., 25:12.

4. Baird-Parker A. C. and Davenport E., 1965, J. Appl. Bacteriol., 28:390.

5. Beckers N. J. et al, 1984, Can. J. Microbiol., 30:470.

6. Horwitz (Ed.), 2000, Official methods of analysis of AOAC International, 17th Ed., Vol. I., AOAC International, Gaithersburg, MD.

7. International Organization for Standardization (ISO), 1983, Draft ISO/DIS 6888.

8. Smith B. A. and Baird-Parker A.C., 1964, J. Appl. Bacteriol., 27:78.

9.Tardio and Baer, 1971, J. Assoc. Off. Anal. Chem., 54:728.

10. The United States Pharmacopoeia, 2018, The United States Pharmacopoeial Convention. Rockville, MD.

11. Zebovitz E., Evans J. B. and Niven C.F., 1955, J. Bacteriol., 70:686.