Descripción

Medio Lowenstein Jensen

APLICACIÓN Y USO DEL MEDIO LOWENSTEIN JENSEN

Medio de cultivo diferencial y selectivo para aislamiento, de Micobacterias de muestras sistémicas, principalmente Mycobacterium tuberculosis.

COMPONENTES DEL MEDIO LOWENSTEIN JENSEN

Fosfato monopotásico.
Sulfato de magnesio.
Citrato de magnesio.
Asparagina.
Glicerina.
Huevos frescos.
Verde malaquita.

CONTENIDO ESTUCHE DEL MEDIO LOWENSTEIN JENSEN

Unidad: Tubo (paquete por 10 unidades, caja por 50 tubos).

MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS:

Indumentaria de trabajo.
Mechero de Bunsen.
Cabina de flujo laminar.
Asas bacteriológicas estériles.
Dispensador.
Licuadora.

METODOLOGÍA:

Principio del método:

Los nutrientes de este medio basal, más los aportados por el agregado de la mezcla de huevos, constituyen un rico soporte para el crecimiento de una gran variedad de Mycobacterias. El verde malaquita inhibe a gran parte de la flora acompañante. Con el agregado de glicerina se estimula el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis, aunque gran parte de M. bovis es inhibido. Agregando un 5% de NaCl, se pueden seleccionar micobacterias tolerantes a la sal, como es el caso de M. smegmatis.

Criterios de desempeño y limitaciones del método:

Medio recomendado para el aislamiento y diferenciación del Mycobacterium tuberculosis.

Preparación de reactivos:

El medio se encuentra listo para ser usado.

Condiciones de almacenamiento y estabilidad de los reactivos:

Almacenar en lugar oscuro para evitar decoloraciones del medio (ya que el color verde del mismo es muy fotosensible), a una temperatura de 2 a 8 ºC, colocando los tubos acostados.

Este medio puede manipularse con cuidado evitando movimientos bruscos o caídas que puedan ocasionar un accidente con los tubos.

La congelación arruina totalmente el medio.

Espécimen o muestra

Muestras clínicas o de laboratorio, industriales o investigativas.

Procedimiento:

Se recomienda, en procedimientos de rutina, inocular la muestra previamente descontaminada, sobre la superficie del medio de cultivo.

A los 7 días de incubación a 35-37°C., se observa por primera vez si hubo crecimiento. Luego, observar cada semana, hasta un total de 8 semanas. O según técnica establecida por la institución.

CÁLCULO DE LOS RESULTADOS ANALÍTICOS:

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO LOWENSTEIN JENSEN

Prueba Macroscópica:

Apariencia: Semi-Sólido color verde esmeralda.

pH final: 6.4 ± 0.2 (25°C).

Volumen: 8,0 mL ±. (depende del volumen del tubo)

Prueba De Esterilidad: Se realiza una prueba de esterilidad sometiendo un número representativo del lote a incubación entre 24 y 120 horas, a 35 – 37°C.
Prueba De Efectividad: La prueba se debe realizar con un control negativo y uno positivo. Prueba realizada a un grupo de Mycobacterias. La efectividad del medio se controla mediante el cultivo de la cepa:

*Microorganismos*	*Cepa*	*Crecimiento*
Mycobacterium tuberculosis H37Ra	ATCC 25177	Satisfactorio
Medio sin inocular	–	Negativo

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DEL MEDIO LOWENSTEIN JENSEN

Para uso de diagnóstico in vitro.
Utilizar el medio de cultivo antes de la fecha de expiración.
Usar elementos de protección personal durante el uso del producto por la exposición a muestras potencialmente peligrosas.
El desecho del medio de cultivo se debe realizar, según los protocolos implementados por cada institución.

Para el desecho de los medios de cultivo se debe ejecutar la desactivación de residuos infecciosos o de riesgo biológico, previamente a la entrega de la empresa encargada de su eliminación.

TECNOLOGÍA – EQUIPO UTILIZADO:

Cabina de flujo laminar.
Incubadora.

BIBLIOGRAFÍA:

Lowenstein. E. 1931. Zentralbl. Bakteriol. Parasitenkd. Infektions kr. Hyg. Abt. I Orig.120:127
Jensen, K.A. 1932. Zentralb. Bakteriol. Parasitenkd. Infektionskr. Hyg. Abt. I Orig. 125:222.
Nelles A. 1966. Methodes Simples de Traitement Preliminaire des Echantillons. Bull. Int. Un. Tuber., 38: 72.
Cetrángolo Abel. 1971. Diagnostico Bacteriológico de la Tuberculosis. Reseñas de Diagnóstico, Publicación Lepetit, 4: Nº 8.
Manual de Bacteriología de la Tuberculosis. Técnicas y Procedi mientos Básicos. Washington D. C. OPS. (CD/TB/ST/LAB), 1973.
Borda Bossana de Texidor D., Texidor C., Domenech de Kwint M. C., Volpe de Molina E. y Pasquinelli E. 1977. Nuevo Método Sen cillo y Económico para Facilitar el Cultivo del Bacilo Tuberculoso, Rev. Argentina de Tuberculosis y Enfermedades Pulmonares, 38:18 34.
Forbes, Sahm and Weissfeld. 1998. In Bailey & Scott’s diagnostic microbiology, 10th ed. Mosby.
Isenberg (ed.). 1992. Clinical microbiology procedures handbook, vol. 1. American Society for Microbiology, Washington, D.C.