Caldo Selenito

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El Caldo Selenito permite el enriquecimiento selectivo de Salmonella spp., mediante muestras de laboratorio, clínicas principalmente provenientes de orina y heces.

Descripción

El caldo selenito es un medio bacteriano enriquecido utilizado para la detección de Salmonella y Shigella. Está compuesto de sodio selenito, glutamato sódico, sal y agar. Se añaden también otros nutrientes como el fosfato monosódico para promover el crecimiento microbiano y proveer materiales requeridos por las bacterias Salmonella y Shigella para su multiplicación. El caldo selenito sirve como un medio selectivo para la identificación de estas dos bacterias concienzudamente.

APLICACIÓN Y USO DEL CALDO SELENITO

El Caldo Selenito es un medio de enriquecimiento selectivo utilizado para la recuperación de especies de salmonella en muestras de alimentos, aguas, heces y otros materiales de importancia sanitaria.

COMPONENTES DEL CALDO SELENITO

  • Lactosa.
  • Fosfato de sodio anhidro.
  • Hidrolizado enzimático de caseína.
  • Agua destilada.

CONTENIDO ESTUCHE- PRESENTACIÓN DEL CALDO SELENITO

  • Tubo
  • Frasco.
  • Botella.

MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS:

  • Indumentaria de trabajo.
  • Mechero de Bunsen.
  • Cabina de flujo laminar.
  • Asas bacteriológicas estériles.
  • Cepas ATCC.
  • Equipos y material de Laboratorio.
  • Medios de cultivo adicionales, según requerimiento.

METODOLOGÍA:

  • Principio del método:

El hidrolizado enzimático de caseína proporciona los compuestos nitrogenados como fuente de carbono, la Lactosa permite mantener el pH uniforme. Cuando el Selenito impide el crecimiento de las bacterias que son inhibidas se genera alcalinidad, pero esta alcalinidad a su vez reduce la actividad tóxica del Selenito, produciendo un crecimiento excesivo de bacterias acompañantes. Por ello la Lactosa al ser fermentada genera acidez y permite mantener el pH neutro y ligeramente alcalino.  El fosfato ayuda a mantener estable el pH. El Selenito Sódico actúa inhibiendo muchas especies de bacterias Gram positivas y negativas, incluidos los coliformes.

La composición química que posee favorece la recuperación de estos microorganismos y a su vez inhibe el crecimiento de otros. Es principalmente tóxico para la mayoría de las bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae. Sin embargo, también permite la recuperación de cepas de Shigella y no inhibe el crecimiento de Pseudomonas y Proteus.

Está compuesto por fosfato de sodio anhidro, peptonas y lactosa. También existe una variante al que se adiciona cistina, de allí su nombre caldo selenito-cistina.

  • Criterios de desempeño y limitaciones del método:

Medio de cultivo líquido selectivo usado para el enriquecimiento de muestras en donde se sospecha la presencia de bacterias enteropatógenos del género Salmonella spp, a partir de muestras clínicas heces, orina, alimentos, líquido o sólidos, entre otros.

  • Preparación de reactivos:

El medio se encuentra listo para ser usado.

  • Condiciones de almacenamiento y estabilidad de los reactivos:

Una vez recibidos en el laboratorio, almacenar en lugar oscuro y seco a una temperatura de 2 a 8ºC en su embalaje original hasta el momento de uso, evitando la exposición a la luz directa, no debe ser congelado con el fin de preservar el medio. 

Antes de inocular los tubos deben estar a temperatura ambiente. 

  • Espécimen o muestra:

Muestras fecales y muestras de alimentos. Para uso clínico, industrial o investigativo. 

Procedimiento:

  1. Contar con un lugar que tenga normas de asepsia estrictas.
  2. Para contar con una técnica estéril, realizar todo el procedimiento junto a la llama del mechero y/o en una cabina de flujo laminar.
  3. Tener asa estéril para la toma de muestra
  4. Realizar el procedimiento según técnicas de cada laboratorio
  5. El tiempo, temperatura y condiciones de incubación dependen del microorganismo que se quiera recuperar. (Para uso general, inocular las muestras directamente en el medio e incubar los tubos durante máximo 7 días entre 35 – 37 °C.
  6. Luego de la incubación, observar el cultivo, según las características de las colonias determinar los posteriores estudios.

CÁLCULO DE LOS RESULTADOS ANALÍTICOS:

CONTROL DE CALIDAD DEL CALDO SELENITO

  • Prueba Macroscópica: 

Apariencia: Líquido amarillo.

pH final: 7.0 ± 0.2 (25°C).

Volumen: Según la presentación del envase.

  • Prueba de Estabilidad: Se realiza una prueba de esterilidad sometiendo un número representativo del lote a incubación entre 24 y 120 horas, a 35 – 37°C.
  • Prueba de Efectividad: La efectividad del medio se controla mediante el cultivo de cepas control ATCC de:
Microorganismos Cepa Crecimiento
Salmonella enteriditis ATCC 13076 Satisfactorio. Crecimiento color rojo
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibición parcial

 

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DEL CALDO SELENITO

  • Para uso de diagnóstico in vitro.
  • Utilizar el medio de cultivo antes de la fecha de expiración.
  • Usar elementos de protección personal durante el uso del producto por la exposición a muestras potencialmente peligrosas.

TECNOLOGÍA – EQUIPO UTILIZADO:

  • Cabina de flujo laminar.
  • Filtro de trompo de 0.2 µm estéril.
  • Jeringa.
  • Agitador.
  • Tubos.

BIBLIOGRAFÍA:

    • Norton C. F., 1986, Microbiology, 2nd Edition, Addison-Wesley Publishing Company.
    • Hunter D. and Kearns M., 1977, Brit. Vet. J., 133:486.
    • Snavely and Brahier, 1960, Am. J. Clin. Pathol 33:511.
    • Becton, Dickinson and Company. Section III Culture Medium and
    • Ingredients Manual of Microbiological Culture Media. Pg 151 -153 Maryland 2003.

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