Caldo Tioglicolato

Descripción

Caldo Tioglicolato

APLICACIÓN Y USO DEL CALDO TIOGLICOLATO

Medio líquido de enriquecimiento para uso general, utilizado en procedimientos cualitativos para la prueba de esterilidad, aislamiento y cultivo de aerobios, anaerobios y microaerófilos que no son exigentes.

 

COMPONENTES DEL CALDO TIOGLICOLATO

• Digerido pancreático de caseína.
• L-cistina.
• Dextrosa (deshidratada)
• Extracto de levadura
• Cloruro sódico
• Tioglicolato de Sodio
• Resazurina

 

CONTENIDO ESTUCHE- PRESENTACIÓN DEL CALDO TIOGLICOLATO

• Tubo.
• Frasco.
• Botella.

MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS:

• Indumentaria de trabajo.
• Mechero de Bunsen.
• Cabina de flujo laminar.
• Asas bacteriológicas estériles.
• Cepas ATCC.
• Auxiliar. 
• Reactivos.
• Equipos de Laboratorio.

 

METODOLOGÍA:

• Principio del método:

La dextrosa, L-cistina y extracto de levadura proporcionan los factores de crecimiento necesarios para el desarrollo bacteriano. El Cloruro de Sodio aporta iones esenciales.

El Tioglicolato sódico es un agente reductor que previene la acumulación de sustancias nocivas para el desarrollo bacteriano, como lo es el peróxido los cuales son letales para muchos microorganismos. De igual manera, la 

L-cistina también es un agente reductor, ya que contiene grupos sulfidrilos

(-SH-) que inactivan los compuestos de metal pesado y mantiene un bajo potencial redox, favoreciendo la anaerobiosis.

La resazurina es un indicador de oxidación-reducción: Presenta un color rosa cuando se oxida y cuando reduce es incolora.

 

• Criterios de desempeño y limitaciones del método:

Medio de cultivo utilizado en microbiología clínica e industrial para la recuperación de microorganismos anaerobios y aerobios, son utilizados para ensayos de control de esterilidad de diversos productos.

 

• Preparación de reactivos:

El medio está listo para su uso.

 

• Condiciones de almacenamiento y estabilidad de los reactivos:

Almacenar en un lugar con poca luz y a temperatura ambiente.

 

• Espécimen o muestra:

Muestras clínicas como tejidos, fármacos, cosméticos y productos biológicos.

 

• Procedimiento:

1. Contar con un lugar que tenga normas de asepsia estrictas.
2. Los tubos pueden inocularse hasta su fecha de caducidad.
3. Para contar con una técnica estéril, se debe realizar todo el procedimiento junto a la llama del mechero bunsen, y en una cabina de flujo laminar.
4. Realizar el procedimiento según técnicas de cada laboratorio. (tener en cuenta las recomendaciones de la USP (Farmacopea de Estados Unidos) y diversos organismos de control.
5. El tiempo, temperatura y condiciones de incubación dependen del microorganismo que se quiera recuperar. (Para uso general, inocular las muestras directamente en el medio e incubar los tubos durante máximo 7 días entre 35 – 37 °C).

 

CÁLCULO DE LOS RESULTADOS ANALÍTICOS:

 

CONTROL DE CALIDAD DEL CALDO TIOGLICOLATO

• Prueba Macroscópica: 

Aspecto medio listo para usar: Líquido amarillo traslúcido.

pH final: 7.1 ± 0.2 (25°C).

Volumen: Según la presentación del envase.

 

• Prueba de Estabilidad: Se realiza una prueba de esterilidad sometiendo un número representativo del lote a incubación entre 24 y 120 horas, a 35 – 37°C.
• Prueba de Efectividad: La efectividad del medio se controla mediante el cultivo de cepas control ATCC de:

 

Microorganismos	Cepa	Crecimiento
Bacillus subtilis	ATCC 6633	Satisfactorio
Staphylococcus aureus	ATCC 6538	Satisfactorio
Pseudomona auriginosa	ATCC 9027	Satisfactorio
Clostridium sporogenes	ATCC 19404	Satisfactorio
Bacteroidis frigilis	ATCC 25285	Satisfactorio
Streptococcus pygenes	ATCC 19615	Satisfactorio

 

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DEL CALDO TIOGLICOLATO

• El material que se examina es biológico por tal razón debe cumplir con normas de manipulación. 
• Los medios de cultivo que van a ser destinados a disposición final, deben colocarse en bolsa roja con su respectivo rótulo, y se debe entregar a la empresa contratada para la recolección de material de desechos biológicos.
• Para el desecho de los medios de cultivo, se debe realizar la respectiva desactivación de residuos infecciosos o de riesgo biológico. Previamente a la entrega de la empresa encargada de su eliminación

 

TECNOLOGÍA – EQUIPO UTILIZADO:

• Balanza.
• Cabina de flujo laminar.
• Master Clave y Autoclave.

 

BIBLIOGRAFÍA:

• Murray P.r., Baron, Pfaller, Tenover and yolken. 1999. Manual of clinical microbiology, 7th ed. american Society for Microbiology, Washington, D.C.
• U.S. Pharmacopenial Convention, Inc. 2009. The U.S. pharmacopeia 32/The national formulary 27. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md.
• Horwitz, W. (ed.). 2000. Official methods of AOAC International, 17th ed, col.1. AOAC International, Gaithersburg. Md.
• Waterworth and Pamela M., 1955, Brit. J. Exp. Pathol., 36:186.
• Becton, Dickinson and Company. Section III Culture Medium and Ingredients Manual of Microbiological Culture Media. Pg 151 -153 Maryland 2003.
• European Pharmacopoeia 6.0, volume 1. 2007. Microbiological Examination of sterile products: Test for specified Microorganisms.