Agar Hektoen Enterico

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Medio moderadamente selectivo y de diferenciación para el aislamiento y el cultivo de microorganismos Gram negativos entéricos,  especialmente para el aislamiento de especies de Shigella a partir de muestras de agua, alimentos y clínicos.

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Descripción

Agar Hektoen Enterico

APLICACIÓN Y USO de Hektoen Enterico:

Medio moderadamente selectivo y de diferenciación para el aislamiento y el cultivo de microorganismos Gram negativos de especies de Shigella y Salmonella; a partir de muestras de agua, alimentos y clínicos.

COMPONENTES DEL AGAR HEKTOEN ENTERICO

  • Peptona de proteosa 
  • Extracto de levadura
  • Lactosa
  • Sacarosa
  • Salicina
  • Sales biliares
  • Cloruro de Sodio
  • Tiosulfato de Sodio
  • Citrato de Amonio Férrico
  • Azul de Bromotimol
  • Fucsina Ácida
  • Agar liofilizado

 

CONTENIDO ESTUCHE DEL AGAR HEKTOEN ENTERICO

  • Unidad, paquete por 10 placas.

 

MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS:

  • Mechero de Bunsen.
  • Asas bacteriológicas.
  • Elementos de protección.
  • Incubadora a 37°C.
  • Guantes. 
  • Cepas ATCC.

 

METODOLOGÍA:

  • Principio del método:

En el medio de cultivo la Proteosa y Extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo microbiano. La lactosa, sacarosa y salicina son los hidratos de carbono fermentables. Las sales biliares inhiben el desarrollo de la flora Gram positiva de algunos coliformes y de la mayoría de las cepas de Pseudomonas spp. 

El azul de bromotimol y la fucsina ácida de los indicadores de la fermentación de hidratos de carbono, mientras que el Citrato de hierro actúa como indicador de la formación de SH2, a partir del tiosulfato, debido a que se forma sulfuro de hierro compuesto de color negro.

El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el agente solidificante.

Las sales biliares hacen que el medio sea selectivo, inhibiendo los microorganismos Gram positivos y reduciendo el crecimiento de algunos microorganismos Gram negativos diferentes de Salmonella y Shigella. 

 

  • Criterios de desempeño y limitaciones del método:

Medio selectivo diferencial utilizado para el aislamiento de especies de Shigella y Salmonella a partir de especímenes patológicos entérico.

 

  • Preparación de reactivos:

El medio se encuentra listo para ser usado.

 

  • Condiciones de almacenamiento y estabilidad de los reactivos:

El medio de cultivo debe ser conservado a una temperatura de 2-8°C, en su empaque original, evitando la exposición a la luz directa, no debe ser congelado con el fin de preservar el medio.

Almacenar las placas en posición invertida para evitar que el agua de condensación caiga sobre la superficie del medio.

 

  • Espécimen o muestra:

Muestras fecales, de alimentos y aguas residuales, para uso clínico, industrial o investigativo.

 

Procedimiento:

  1. Contar con un lugar que tenga normas de asepsia estrictas.
  2. Para contar con una técnica estéril, realizar todo el procedimiento junto a la llama del mechero y/o en una cabina de flujo laminar.
  3. Tener asa estéril para la toma de muestra.
  4. Sembrar suavemente sobre la superficie del producto.
  5. Incubar las placas entre 35 – 37°C en posición invertida, por 18-24-48-72 horas, según las técnicas implementadas por cada laboratorio
  6. Dependiendo de las exigencias del microorganismo almacenar en la atmósfera adecuada.
  7. Luego de la incubación, observar el cultivo, según las características de las colonias determinar los posteriores estudios.

 

CÁLCULO DE LOS RESULTADOS ANALÍTICOS:

 

CONTROL DE CALIDAD DEL AGAR HEKTOEN ENTERICO

  • Prueba Macroscópica: 
  • Apariencia: Medio de cultivo semisólido de color verde traslúcido.
  • pH final: 7.5 ± 0.2 (25°C).
  • Volumen: 19 mL±.
  • Prueba de esterilidad: Se realiza una prueba de esterilidad sometiendo un número representativo del lote a incubación entre 24 y 120 horas, a 35 – 37°C.
  • Prueba de efectividad: La efectividad del medio se controla mediante el cultivo de cepas con el siguiente control ATCC de:

 

 

Microorganismos Cepa Crecimiento
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibición parcial. Colonias amarillas.
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Inhibición parcial. Colonias amarillas.
Salmonella enteritiditis ATCC 13076 Crecimiento colonias de color verde a azul verdoso con centro negro.
Shigella flexneri ATCC 12022 Crecimiento Satisfactorio. Colonias verdes claro.

 

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DEL AGAR HEKTOEN ENTERICO

  • Para uso de diagnóstico in vitro.
  • Utilizar el medio de cultivo antes de la fecha de expiración.
  • Usar elementos de protección personal durante el uso del producto por la exposición a muestras potencialmente peligrosas.
  • El desecho del medio de cultivo se debe realizar, según los protocolos implementados por cada institución.

 

TECNOLOGÍA – EQUIPO UTILIZADO:

  • APS One.
  • Cabina de flujo laminar.
  • Master Clave.
  • Autoclave.
  • Cepario.

 

BIBLIOGRAFÍA:

  • Hunter D. and Kearns M., 1977, Brit. Vet. J., 133:486.
  • Snavely and Brahier, 1960, Am. J. Clin. Pathol., 33:511.
  • Waterworth and Pamela M., 1955, Brit. J. Exp. Pathol., 36:186.
  • Becton, Dickinson and Company. Section III Culture Medium and
  • Ingredients Manual of Microbiological Culture Media. Pg 151 -153 Maryland 2003.
  • Normatividad de reactivos de diagnóstico in vitro, decreto 3770 de 2004, decreto 4124 de 2008, Ministerio de Salud y Protección Social. • NCCLS. Quality control for commercially prepared microbiological culture media; approved standard- Third edition. Vol 24 number 19 June 2004. •The Himedia Manual, 2009 a manual of microbiology laboratory practice.

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