Tripsina de Versene

Descripción

Tripsina de Versene

APLICACIÓN Y USO DE LA TRIPSINA DE VERSENE

La Tripsina es uno de los componentes del cultivo celular (materia prima) que ayuda al desprendimiento de células desde la superficie del recipiente del cultivo.

COMPONENTES DE LA TRIPSINA DE VERSENE

• Cloruro de Sodio
• Cloruro de Potasio
• Versene (EDTA).
• Tripsina.
• Rojo de Fenol.
• Agua desionizada.
• Fosfato de Sodio.
• Fosfato de Potasio.
• Bicarbonato de sodio.

CONTENIDO DEL EMPAQUE DE LA TRIPSINA DE VERSENE

• Envase x 40 mL.
• Envase x 50 mL.
• Envase x 80 mL.
• Envase x 100 mL.
• Envase x 200 mL.
• Envase x 400 mL.
• Envase x 500 mL.
• Envase x Litro.

MATERIALES PARA LA PREPARACION DE LA TRPSINA DE VERSENE ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS:

• Mechero de Bunsen.
• Elementos de protección.
• Neveras de icopor.
• Pilas de hielo.
• Filtro con membrana de 0.2 μm.
• Mangueras.
• Tanque pulmón.
• Erlenmeyer.
• Vaso de precipitado.
• Guantes.
• Filtros con membrana de 0.2 μm.
• Pipetas pasteur.
METODOLOGÍA:
• Principio del método:
El EDTA, es un quelante de cationes divalentes, se agregan a soluciones de tripsina para mejorar la actividad, eliminando el Calcio y el Magnesio de la superficie celular, lo que permite a la tripsina hidrolizar enlaces peptídicos específicos.
• Criterios de desempeño y limitaciones del método
Para uso en investigación.
• Preparación de reactivos
El medio se encuentra listo para ser usado.

• Condiciones de almacenamiento y estabilidad de los reactivos
Almacenar a congelación entre 0oC y – 30oC. Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados y almacenados.
• Espécimen o muestra
Investigación de células.
• Procedimiento
1. Contar con un lugar que tenga normas de asepsia estrictas.
2. Para contar con una técnica estéril, realizar todo el procedimiento junto a la llama del mechero, y en una cabina de flujo laminar.
3. Usar instrumentos que garanticen la esterilidad del producto.

CÁLCULO DE LOS RESULTADOS ANALÍTICOS:
CONTROL DE CALIDAD DE LA TRIPSINA DE VERSENE

o Interno
• Aspecto: Líquido.
• Color: Color rosado o rojo traslúcido.
• pH final: 7.2 ± 0.2 (25°C).
• Control de esterilidad: Se realiza una prueba de esterilidad
sembrando una alícuota del producto en agar sangre e incubándolo entre 72 a 120 horas a 37 oC.

o Externo
• Prueba de efectividad: N/A.

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DE LA TRIPSINA DE VERSENE

• Utilizar el producto antes de la fecha de expiración.
• Las extracciones frecuentes de pequeñas cantidades, pueden ocasionar contaminaciones en el contenido.
• Use solo si la solución está clara.
• Para el manejo del producto, con agentes contaminantes utilizar la indumentaria de protección adecuada.
• Mantener los recipientes abiertos el menor tiempo posible.

TECNOLOGÍA – EQUIPO UTILIZADO PARA LA PREPARACION DE LA TRIPSINA DE VERSENE

• Cabina de flujo laminar
• Incubadora.

• Filtro de jeringa (0.2um)
• Equipo de filtración (0.65-0.2um)
• Grafadora.
• Potenciometro.
• Balanza.
• Equipo de agitación magnética.
BIBLIOGRAFÍA:
• Harrison, Mauren (1997). General Techniques of Cell Culture. Cambrigde University. Versión 1.