Agar XLD

Descripción

Aplicación y uso de Agar XLD:

El agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es un medio selectivo diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de patógenos entéricos Gram negativos, especialmente del género Shigella a partir de muestras clínicas.

 

COMPONENTES DEL AGAR XLD

• • Extracto de Levadura.
  • L-Lisina.
  • Xilosa.
  • Lactosa.
  • Sacarosa.
  • Desoxicolato de Sodio
  • Amonio Citrato Férrico
  • Tiosulfato de Sodio
  • Cloruro de Sodio
  • Agar liofilizado

• Rojo de Fenol

 

CONTENIDO ESTUCHE DEL AGAR XLD

• Unidad. Paquete por 10 placas.

 

MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS:

• Mechero.
• Asas bacteriológicas.
• Elementos de protección.
• Incubadora.
• Cepas ATCC.

 

METODOLOGÍA:

• Principio del método:

El agar XLD contiene Extracto de Levadura como fuente de nutrientes y vitaminas. Utiliza el Desoxicolato de Sodio como agente selectivo y, por consiguiente, inhibe los microorganismos Gram positivos. La xilosa se incorpora en el medio dado que la fermentan prácticamente todos los entéricos, excepto Shigella, y esta propiedad hace posible la diferenciación de dicha especie. La Lisina se incluye para permitir la diferenciación del grupo Salmonella de los organismos no patógenos, dado que, sin lisina, Salmonella fermentaría rápidamente la Xilosa y no se distinguiría de las especies no patógenos. Cuando la Salmonella agota el suministro de Xilosa, la lisina es atacada por la enzima lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio de pH alcalino que imita la reacción de Shigella. Para evitar el cambio similar en los organismos coliformes positivos a la lisina, se añaden Lactosa y Sacarosa para producir ácido en exceso. 

Para aumentar la capacidad de diferenciación de la fórmula, se incluye un sistema indicador de H2S (Ácido Sulfhídrico), formado por Tiosulfato Sódico y Citrato Férrico Amónico, para la visualización del ácido sulfhídrico producido, lo que origina la formación de colonias con centros de color negro. Los organismos no patógenos no productores de H2S no descarboxilan la lisina; por tanto, la reacción ácida producida por dichos organismos evita el oscurecimiento de las colonias, lo que sucede sólo con pH alcalino o neutro.

 

• Criterios de desempeño y limitaciones del método:

Aislamiento moderadamente selectivo y diferencial de patógenos Gram negativos de Salmonella y Shigella, especialmente Género Shigella.

 

• Preparación de reactivos:

El medio se encuentra listo para ser usado.

• Condiciones de almacenamiento y estabilidad de los reactivos:

El medio de cultivo debe ser conservado a una temperatura de 2-8°C, en su empaque original, evitando la exposición a la luz directa, no debe ser congelado con el fin de preservar el medio.

Almacenar las placas en posición invertida para evitar que el agua de condensación caiga sobre la superficie del medio.

 

• Espécimen o muestra

Muestras fecales, de alimentos y aguas residuales, para uso clínico, investigativo o industrial.

 

• Procedimiento:

1. Contar con un lugar que tenga normas de asepsia estrictas.
2. Para contar con una técnica estéril, realizar todo el procedimiento junto a la llama del mechero y/o en una cabina de flujo laminar.
3. Tener asa estéril para la toma de muestra.
4. Sembrar suavemente sobre la superficie del producto.
5. Incubar las placas entre 35 – 37°C en posición invertida, por 18-24-48-72-120 horas, según las técnicas implementadas por cada laboratorio.
6. Dependiendo de las exigencias del microorganismo almacenar en la atmósfera adecuada.
7. Luego de la incubación, observar el cultivo, según las características de las colonias determinar los posteriores estudios.

 

CÁLCULO DE LOS RESULTADOS ANALÍTICOS:

 

CONTROL DE CALIDAD DEL AGAR XLD

• Prueba Macroscópica: 

• Apariencia: Medio de cultivo semisólido de color rojo-naranja

• pH final: 7.4 ± 0.2 (25°C).

• Volumen: 19 mL ±.

• Prueba de Estabilidad: Se realiza una prueba de esterilidad sometiendo un número representativo del lote a incubación entre 24 y 120 horas, a 35 – 37°C..
• Prueba de Efectividad: La efectividad del medio se controla mediante el cultivo de cepas control ATCC de:

 

Microorganismos	Cepa	Características
Salmonella enteriditis	ATCC 13076	Crecimiento Satisfactorio Colonias de color rojo con centro negro.
Shigella flexneri	ATCC 12022	Crecimiento Satisfactorio. Colonias rojas.
Enterococcus faecalis	ATCC 29212	Inhibición total
Escherichia coli	ATCC 25922	Inhibición parcial. Colonias amarillentas.

 

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DEL AGAR XLD

• Para uso de diagnóstico in vitro.
• Utilizar el medio de cultivo antes de la fecha de expiración.
• Usar elementos de protección personal durante el uso del producto por la exposición a muestras potencialmente peligrosas. 
• El desecho del medio de cultivo se debe realizar, según los protocolos implementados por cada institución.

 

TECNOLOGÍA – EQUIPO UTILIZADO:

• APS One.
• Cabina de flujo laminar.
• Master Clave.
• Autoclave.
• Incubadora.
• Cepario.

 

BIBLIOGRAFÍA:

• Taylor, W. I. 1965. Isolation of shigelae. I. Xylose lysine agars; new media for isolation of enteric pathogens. Am. J. Clin. Pathol. 44(4): 471-475.
• Rollender, W., O. Beckford, R.D. Belsky, and B. Kostroff. 1969. Comparison of xylose lysine deoxicholate agar and MacConkey agar for the isolation of Salmonella and Shigella from clinical specimens. Tech. Bull. Reg. Med. Tech. 39(1):8-10.3. URL: http://www.bd.com/ds/technicalCenter/inserts/XL_Agar_Base.pdf 
• Becton, Dickinson and Company. Section III Culture Medium and Ingredients Manual of Microbiological Culture Media. Pg 151 -153 Maryland 2003.