Agar Chocolate

El agar Chocolate es un medio enriquecido no selectivo, destinado principalmente a la recuperación de Neisserias (gonococos y meningococos) y Haemophilus, pero en él pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes.

APLICACIÓN Y USO DEL AGAR CHOCOLATE

El Agar Chocolate es un medio enriquecido no selectivo, usado para el crecimiento de cepas exigentes, especialmente los géneros Neisseria, Haemophilus, entre otros.

COMPONENTES DEL AGAR CHOCOLATE

• Infusión corazón de ternera.
• Digerido péptico de tejido animal.
• Cloruro de sodio.
• Sangre de cordero liofilizada.
• Extracto de levadura.
• Complemento vitamínico.

CONTENIDO DEL EMPAQUE DEL AGAR CHOCOLATE

• Unidad, paquete de 10 placas.

MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS:

• Mechero.
• Asas bacteriológicas.
• Elementos de protección.
• Incubadora.
• Cepas ATCC.

METODOLOGÍA:

• Principio del método:

El medio contiene nutrientes nitrogenados en forma de caseína y peptonas de carne, tampón de fosfato, para mantener el pH y almidón de maíz, que neutraliza los ácidos grasos tóxicos que pueden estar presentes en el agar. 

La hemoglobina suministra el factor X (hemin) y el calor libera el factor V (nicotina adenina dinucleótido NAD) para el desarrollo de las especies de Haemophilus spp. El enriquecimiento favorece una mayor concentración de los factores V y X además de vitaminas, aminoácidos, coenzimas, dextrosa, ion férrico y otros factores que mejoran la recuperación de microorganismos como Neisseria spp. y Haemophilus spp.

El agar chocolate puede ser un medio enriquecido si añadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en los glóbulos rojos; estos enriquecimientos se pueden encontrar en el mercado de forma diferente según las casas comerciales (Polivitex, Isovitalex, etc).

Este medio puede usarse para hacer subcultivos y obtener cultivos puros.

• Criterios de desempeño y limitaciones del método:

Aislamiento de bacterias exigentes.

• Preparación de reactivos:

El medio se encuentra listo para ser usado.

• Condiciones de almacenamiento y estabilidad de los reactivos:

El medio de cultivo debe ser conservado a una temperatura de 2-8°C, en su empaque original, evitando la exposición a la luz directa, no debe ser congelado con el fin de preservar el medio.

Almacenar las placas en posición invertida para evitar que el agua de condensación caiga sobre la superficie del medio.

• Espécimen o muestra:

Muestras clínicas, de investigación o industriales.

• Procedimiento:

1. Contar con un lugar que tenga normas de asepsia estrictas.
2. Para contar con una técnica estéril, realizar todo el procedimiento junto a la llama del mechero y/o en una cabina de flujo laminar.
3. Tener asa estéril para la toma de muestra.
4. Sembrar suavemente sobre la superficie del producto.
5. Incubar las placas a 37°C en posición invertida, 18-24-48-72-120 horas, según las técnicas implementadas por cada laboratorio.
6. Dependiendo de las exigencias del microorganismo almacenar en la atmósfera adecuada.
7. Luego de la incubación, observar el cultivo, según las características de las colonias determinar los posteriores estudios.

CÁLCULO DE LOS RESULTADOS ANALÍTICOS:

         CONTROL DE CALIDAD

• Prueba Macroscópica: 

• Apariencia: Medio de cultivo semisólido de color marrón.
• pH final: 6.8 ± 0.2 (25°C).
• Volumen: 19 ± mL. 
• Prueba de esterilidad: Se realiza una prueba de esterilidad sometiendo un número representativo del lote a incubación entre 24 y 120 horas, a 35 – 37°C.
• Prueba de efectividad: La efectividad del medio se controla mediante el cultivo de cepas con el siguiente control ATCC de:
  

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DEL AGAR CHOCOLATE

• Para uso de diagnóstico in vitro.
• Utilizar el medio de cultivo antes de la fecha de expiración.
• Usar elementos de protección personal durante el uso del producto por la exposición a muestras potencialmente peligrosas. 
• El desecho del medio de cultivo se debe realizar, según los protocolos implementados por cada institución.

TECNOLOGÍA – EQUIPOS UTILIZADOS:

• APS One, 
• Cabina de flujo laminar.
• Master Clave.
• Autoclave.
• Incubadora.
• Cepario.

BIBLIOGRAFÍA:

• Norton C. F., 1986, Microbiology, 2nd Edition, Addison-Wesley Publishing Company.
• Hunter D. and Kearns M., 1977, Brit. Vet. J., 133:486.
• Snavely and Brahier, 1960, Am. J. Clin. Pathol., 33:511.
• Becton, Dickinson and Company. Section III Culture Medium and Ingredients Manual of Microbiological Culture Media. Pg 151 -153 Maryland 2003.